| 稿件标题： | 人LDH-B基因克隆及其真核表达载体的构建 |
| 稿件作者： | 胡湘麟，卿 鑫，曾凡才 |
| 关键字词： | 【关键词】 L-乳酸脱氢酶； 基因； 克隆，分子； 遗传载体； 真核细胞 |
| 文章摘要： | 【摘 要】 目的 克隆人乳酸脱氢酶B（LDH-B）基因并构建其真核表达载体。 方法 提取人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的总RNA，逆转录生成cDNA，以cDNA为模板，采用PCR扩增获得LDH-B基因编码区序列片段，限制性核酸内切酶Bam HⅠ和KpnⅠ双酶切LDH-B基因片段及pUC19质粒，连接反应构建pUC19-LDH-B克隆载体，并将其转入大肠埃希菌DH5α感受态细胞，蓝白筛选挑取白色菌落，酶切验证后测序鉴定。将序列正确的LDH-B基因亚克隆到pcDNA3.1（-）载体上，构建LDH-B真核表达载体pcDNA3.1（-）-LDH-B。 结果 PCR扩增后可见约1.0 kb的特异性条带，与预期的LDH-B片段长度相符合；Bam HⅠ和KpnⅠ双酶切pUC19-LDH-B后可见约2.6 kb和1.0 kb的条带，分别与pUC19和LDH-B的片段长度相符合，LDH-B测序结果与DNA序列数据库（Genebank）中的参考序列相一致；Bam HⅠ和KpnⅠ双酶切pcDNA3.1（-）-LDH-B后可见约5.5 kb和1.0 kb的条带，分别与pcDNA3.1（-）和LDH-B的片段长度相符合。 结论 成功克隆了人LDH-B基因，并构建了其真核表达载体，为进一步探究LDH-B的生物学功能奠定了基础。 |
| 文章基金： | 基金项目：国家级大学生创新创业训练计划项目（201410632010）。 |
| 杂志名称： | 现代医药卫生 |
| 文章刊期： | 2016年32卷20期 |
| 文章栏目： | 论著 |
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